人参皂甙Rb1对马桑内酯癫痫的作用及海马蛋白组表达的影响

摘要：目的:观察人参皂甙Rb1(GRb1)对马桑内酯(CL)所致大鼠癫痫及海马神经元损伤的作用,运用双向电泳(2-DE)技术获得可能与CL癫痫发作及GRb1神经保护作用有关的蛋白质成分,探讨海马组织蛋白质在癫痫发生发展过程中的作用和地位及GRb1对其的影响.方法:雄性成年SD大鼠随机均分为对照组、CL组和GRb1 +CL组(n=10）.GRb1+CL组在实验前3d,大鼠每日灌胃GRb1( 1.5mg/ml,30mg/kg),另2组灌胃等量生理盐水；实验日CL组和GRb1+CL组腹腔注射CL (1mg/ml,4mg/kg),对照组腹腔注射等量生理盐水.观察各组大鼠的行为学变化3h.各组半数动物麻醉后灌注固定,HE染色观察海马组织学改变.半数动物,断头处死剥离海马组织并提取蛋白,双向电泳(2-DE)分离,ImageMaster 2D Platinum v5.0软件差异表达蛋白质组分析,基质辅助激光解吸附离子化飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质.结果:①癫痫发作的行为表现:对照组大鼠未见痫性发作；CL组痫性发作程度较高（Ⅲ～Ⅴ级）；与CL组相比,GRb1+ CL组大鼠的痫性发作程度明显减低,潜伏期变长,持续时间变短(P＜0.01).②海马组织学(HE染色)改变:对照组大鼠海马组织结构正常；CL组大鼠可见海马神经元变性坏死,尤以CA3区和齿状回明显;GRb1+CL组大鼠海马神经元结构无明显改变.③获得大鼠海马组织蛋白质组双向电泳图谱；差异表达蛋白质组分析显示GRb1+CL组与对照组差异蛋白斑点84个,GRb1+CL组与CL组差异蛋白斑点120个.④鉴定出6个蛋白质分别是:脑肌酸激酶(brain creatine kinase)、吞蛋白A1 (endophilin-A1)、UPF0628蛋白C10orf96同源物(UPF0628 protein C10ort96 homolog)、细胞色素P-450 (cytochrome P-450)、磷导素样蛋白(phosducin-like protein)及桥整合蛋白3(bridging integrator 3).其中前3个蛋白质在GRb1 +CL组表达低于CL组,后3个蛋白质在GRb1 +CL组表达低于对照组.结论:GRb1可减轻CL所致大鼠癫痫的发作程度及海马神经元损伤.CL组、GRb1+CL组和对照组的表达蛋白质组相比存在明显差异.鉴定出的差异表达的蛋白质brain creatine kinase、endophilin-A1、UPF0628 protein C10orf96 homolog可能与CL所致癫痫发作有关；cytochrome P-450、phosducin-like protein及bridging integrator 3可能与GRb1的神经保护作用有关.